กิจกรรมฆ่าแมลงและผลการควบคุมทางชีวภาพของ Autogra pha californica multiplenucleopolyhedrovirus ((AcMNPV) บนลาร์วของ Spodoptera frugiperda

เชิงนามธรรม

หนอนกระทู้ผักในฤดูใบไม้ร่วง Spodoptera frugiperda เป็นหนึ่งในศัตรูพืชที่สำคัญที่สุดในข้าวโพด ซึ่งบุกเข้ามาในประเทศจีนใหม่ เพื่อที่จะกำหนดผลการควบคุมของ Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) บนตัวอ่อนของ S.frugiperda กิจกรรมการฆ่าแมลงและผลการควบคุมทางชีวภาพของ AcMNPV บน S.frugiperda ได้รับการศึกษาและวิเคราะห์โดยวิธีการทดสอบทางชีวภาพและการทดสอบประสิทธิภาพภาคสนาม ผลการวิจัยพบว่าค่ามัธยฐานความเข้มข้นที่ทำให้เสียชีวิต (LC₅₀) ของ AcMNPV ที่ทำหน้าที่ในวันที่ 2^ndตัวอ่อน instar ของ S.Frugiperda อยู่ที่ 2.9x 10⁷PIB/mL ประสิทธิภาพการควบคุมโดยเฉลี่ยคือ 10⁷PIB/มล. ระบบกันสะเทือน AcMNPV+Bt (1500 มล./ชม²) บน S.frugiperda อยู่ที่ 68.99% ในวันที่ 10^ไทยวันและ 66.87% ในวันที่ 15^ไทยวันหลังการให้ยา ในที่สุด ซอฟต์แวร์ DNAMAN 6.0 ก็ถูกใช้เพื่อระบุ DNA ที่คล้ายคลึงกันของแมลงที่ตายแล้ว และผลลัพธ์ที่ได้แสดงให้เห็นว่าลำดับยีน polh, lef-8 และ lef-9 ของแมลงที่ตายแล้วและ S.Frugiperda อยู่ที่ 100 % เหมือนกัน ผลลัพธ์ข้างต้นทั้งหมดสามารถตรวจสอบเพิ่มเติมได้ว่า AcMNPV อาจมีบทบาทสำคัญในการควบคุม S.frugiperda. แนะนำว่า 10⁷PIB/มิลลิลิตร AcMNPV＋บาท ระบบกันสะเทือน (1500 มล./ชม²)ควรทาที่จุดสูงสุดของการเกิดตัวอ่อนของ S.frugiperda และหลัง 16.00-17.00 น. ในวันที่มีแดดจัด เพื่อหลีกเลี่ยงอิทธิพลของอุณหภูมิและแสงที่สูง เพื่อให้การเตรียมไวรัสสามารถเล่นได้ดีขึ้น บทบาทและปรับปรุงผลการควบคุมต่อ S.frugiperda

คำสำคัญ: AcMNPV;Spodoptera frugiperda;แมลงจำพวกผีเสื้อ;ตัวอ่อน;สารกำจัดศัตรูพืชทางชีวภาพ;AcMNPV＋บีที ช่วงล่าง-กิจกรรมฆ่าแมลงการป้องกันและควบคุมสีเขียว

Spodoptera frugiperda เป็นศัตรูพืชอพยพทุกชนิดที่เข้ามาในจีนจากเมียนมาร์ในปี 2562 และแพร่กระจายอย่างรวดเร็วไปยัง 1,518 อำเภอใน 26 มณฑลและเขตเทศบาลในประเทศจีน ก่อให้เกิดภัยคุกคามร้ายแรงต่อความมั่นคงทางอาหารของจีน จนถึงขณะนี้ ในกลยุทธ์การควบคุมของ Armyworm การควบคุมการระบาดของพยาธิไส้เดือนยังคงขึ้นอยู่กับการใช้ยาฆ่าแมลงที่เป็นสารเคมีในปริมาณมากการใช้สารเคมีกำจัดศัตรูพืชมากเกินไปอาจทำให้เกิดความต้านทานต่อศัตรูพืช การแพร่กระจายของสารตกค้างและสิ่งแวดล้อมและมลภาวะปัญหาร้ายแรงหลายอย่างได้จำกัดการพัฒนาที่ยั่งยืนของการเกษตรสมัยใหม่อย่างจริงจัง ดังนั้น การใช้วิธีควบคุมทางชีวภาพหรือการทดแทนสารกำจัดศัตรูพืชทางชีวภาพการใช้ยาฆ่าแมลงเพื่อควบคุม Armyworm มีความสำคัญมากขึ้นเรื่อยๆ และได้รับความสนใจเพิ่มมากขึ้น

Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus AcMNPV เป็นไวรัส polyhedrosis นิวเคลียร์แบบหลายเกรนที่แยกได้จากตัวอ่อนของ Argyria alfalfa มันสามารถแพร่เชื้อข้ามสัตว์รบกวนจำพวก lepidopteran มากกว่า 30 ชนิด เช่น มอดบีท มอดกะหล่ำปลี อาร์ไจเรียอาร์ไจรา และคาลิปเทราเทอริสอยเดส ชนิดผสมกับบีทีและยาฆ่าแมลงอื่นๆ และไวรัสศัตรูพืชที่ไม่ใช่เป้าหมาย เนื่องจากการทำงานร่วมกันมีผลการทำงานร่วมกันอย่างเห็นได้ชัดกับศัตรูพืช Noctuidae หลายชนิด และยังขยายขอบเขตสเปกตรัมของการฆ่าแมลงให้กว้างขึ้นอีก และปรับปรุงผลของการฆ่าแมลงAcMNPV เป็นสารกำจัดศัตรูพืชชนิดใหม่สำหรับไวรัสแมลงที่พัฒนาโดย Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD.เป็นการผสมผสานระหว่างไวรัสโพลีฮีโดรซีสนิวเคลียร์อาร์ไจเรียอัลฟัลฟาและสารเสริมฤทธิ์ของไวรัสบีทีที่มีศักยภาพด้วยฤทธิ์ฆ่าแมลงที่ดี A จึงถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในผัก ไม้ผล ข้าว และสาขาอื่นๆในบทความนี้ กิจกรรมการฆ่าแมลงและผลการควบคุมทางชีวภาพของ Autographa californica mul-tiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) ต่อ Spodoptera frugiperda ได้รับการตรวจพบและประเมินโดยการทดสอบกิจกรรมในห้องปฏิบัติการและการทดลองภาคสนาม เพื่อให้การสนับสนุนข้อมูลสำหรับการใช้งานในวงกว้างของไวรัส polyhedrosis นิวเคลียร์ใน การควบคุมทางชีวภาพของ Spodoptera frugiperda ในข้าวโพดเป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการลงทะเบียนและการใช้สารแขวนลอยของ AcMNPV บวก Bt ในการควบคุมพยาธิตัวกลม

1.วัสดุและวิธีการ

1.1ทดสอบไวรัสและสารชีวภาพ

ไวรัสที่ทดสอบคือ Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) เมื่อวันที่ 20 พฤษภาคม 2019 Spodoptera frugiperda ถูกเก็บจากทุ่งข้าวโพดในเมือง Xiantao มณฑลหูเป่ย และดำเนินการทดสอบคัดกรองการติดเชื้อไวรัสในห้องปฏิบัติการของบริษัท Wuhan Unioasis Biological Technology Co. บจก.(ซึ่ง Autographa Californica multiplenucleopolyhedrovirus AcMNPV มีฤทธิ์ในการติดเชื้อสูงต่อ Spodoptera frugiperda) ตัวอ่อนของ Spodoptera frugiperda ถูกเลี้ยงเพื่อเพิ่มจำนวนและแพร่พันธุ์ ตัวอ่อนที่ตายแล้วที่ติดเชื้อไวรัสจะถูกบดด้วยน้ำกรองผ่านผ้ากอซ 3 ชั้นและกรอง ถูกปั่นเหวี่ยงที่ 600r/min และ 300r/min จำนวนไมโครคือ 1.8 ×10¹⁰โพลีเฮดราที่มีความรุนแรงต่อมล. (โพลีเฮดราลินคลูชันบอดี้ PIB) นั่นคือเพื่อให้ได้เกรดทางเทคนิคที่บริสุทธิ์ของไวรัสโพลิฮีโดรซิส (1.8 x 10¹⁰PIB/มล.) เก็บรักษาไว้ในอุณหภูมิต่ำและพักไว้

สารชีวภาพที่ทดสอบคือ Autographa California Nuclear Polyhedrosis.Bacillus thuringiensis สำหรับ AcNPV.Bt แบบสั้น (1.0 ×107 PIB/mL)ได้รับการพัฒนาโดย Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD และผลิตโดยบริษัทในเครือ Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD.

1.2ทดสอบแมลง

แมลงทดลองคือ Spodoptera frugiperdaเมื่อวันที่ 20 กรกฎาคม 2019 ตัวอ่อนของ Spodoptera frugiperda ถูกรวบรวมจากทุ่งข้าวโพดฤดูร้อนในหมู่บ้านป่านเฉียว เมืองต้าชางเจิ้น อำเภอถงซาน มณฑลหูเป่ย และนำกลับไปที่ห้องปฏิบัติการของสถาบันวิจัยดินและปุ๋ยอารักขาพืชของสถาบันหูเป่ย Academy of Agricultural วิทยาศาสตร์ ใบข้าวโพดสดและอ่อนนุ่มถูกป้อนด้วยหัวเดียวในจานเพาะเชื้อพลาสติกแบบใช้แล้วทิ้ง (เส้นผ่านศูนย์กลาง 8 ซม. สูง 3 ซม.)เงื่อนไขการให้อาหารในร่มคือ: (25 ± 1) ℃ และความชื้นสัมพัทธ์ 60% -70% ช่วงแสงคือ 16L: 8Dหลังจากการสืบพันธุ์หลายรุ่น บล็อกไข่สดและสเตอริไลซ์จะยังคงอยู่เพื่อการใช้งาน

1.3กิจกรรมทางห้องปฏิบัติการของ Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) กับ spodoptera frugiperda

การไล่ระดับความเข้มข้นหกระดับ 1.0 ×10⁹, 1.0 ×10⁸, 1.0 ×10⁷, 1.0 ×10⁶, 1.0 ×10⁵, 1.0 ×10⁴ได้รับการออกแบบในการทดลองนี้ ขั้นแรก TC ของ AcNPV ถูกเจือจางเป็น 1.0 ×10⁹PIB/มิลลิลิตร แล้วเจือจาง 10 ครั้งเพื่อให้ได้สารเจือจางอื่นๆ ที่มีความเข้มข้นต่างกัน การทดลองได้รับการปฏิบัติด้วยการควบคุมที่ว่างเปล่า มีการดำเนินการทั้งหมด 7 กระบวนการ โดยแต่ละกระบวนการทำซ้ำ 3 ครั้ง

นำวิธีการให้อาหารแบบส่วนของใบมาใช้ กล่าวคือ ใบอ่อนข้าวโพดสด (ยาว 2 ซม. × กว้าง 2 ซม.) ได้รับการบำบัดด้วยสเปรย์ระงับไวรัสก่อน จากนั้นจึงให้อาหารตัวอ่อน และให้อาหารหัวเดียวในจานเพาะเชื้อแถบป้อนอาหารได้แก่ อุณหภูมิ (25±1)°C เฟสต่อความชื้น (60% ~ 70%) ช่วงแสง (16 ลิตร:8 วัน) หลังจากรับประทานใบข้าวโพดที่เป็นพิษแล้ว ควรเติมใบข้าวโพดสดปลอดสารพิษลงไป ทันที48 ตัวอ่อนระยะที่สองของ Armyworm ได้รับการบำบัดซ้ำๆ อ้างอิงส่วนที่ 9{9-11} เมื่อพิจารณาการเปลี่ยนแปลงของการแพร่กระจายของไวรัสในเซลล์และโฮสต์ของตระกูลผีเสื้อกลางคืน จำนวนแมลงที่ตายเนื่องจากไวรัสและ ตรวจสอบจำนวนแมลงที่ตายแล้วทั้งหมดที่ 7 และ 10 วันหลังการติดเชื้อ และคำนวณอัตราการตายและคำนวณ LC50

1.4การทดสอบภาคสนามเกี่ยวกับผลการควบคุมสารแขวนลอย AcMNPV.Bt 10 ล้านตัวต่อตัวอ่อนของหนอนพยาธิ

การทดสอบประสิทธิภาพภาคสนามดำเนินการในแปลงข้าวโพดฤดูร้อนของหมู่บ้านเสี่ยวหยวน เมืองจวงหวัง เทศมณฑลตงชาน มณฑลหูเป่ยพื้นที่ทดสอบมีทั้งหมด 1,500 ม^２ชนิดของดินเป็นดินแคลเซียม ค่า pH อยู่ที่ 6.8 ปริมาณอินทรียวัตถุอยู่ที่ 13.9% และความอุดมสมบูรณ์ปานกลางถึงสูง ข้าวโพดปลูกได้ตลอดทั้งปี และพันธุ์ข้าวโพดคือ Xiyu No. 3 ในวันที่ 13 กรกฎาคม ,2020, ปุ๋ยผสม 45% 750กก./ชม^２จะถูกนำไปใช้เป็นปุ๋ยพื้นฐานและหว่านตั้งแต่ปี 2019 เป็นต้นมา ได้เกิด Fall armyworm ขึ้นอย่างร้ายแรงในสาขานี้

สารแขวนลอย AcMNPV.BT ทั้งหมด 10 ล้านตัว (1500 มล./ ชม²) และ emamectin benzoate 15% ระบบกันสะเทือนแบบอินโดคาร์บ (300 มล./ ชม.²) ยาฆ่าแมลงที่ใช้กันทั่วไปและการควบคุมเปล่าได้รับการรักษาด้วย 3 การบำบัดการบำบัดแต่ละครั้งทำซ้ำ 4 ครั้ง รวม 12 แปลงทดลอง แต่ละแปลงครอบคลุมพื้นที่ 100 เมตร²

ในช่วงบ่ายของวันที่ 26 สิงหาคม 2563 (เมื่อมีตัวอ่อนของ Spodoptera frugiperda เกิดขึ้นบ่อยครั้ง) ให้ฉีดยาฆ่าแมลง 1 ครั้งในตอนเย็นใช้สเปรย์ไฟฟ้าสะพายหลังอเนกประสงค์ยี่ห้อ Lebang 3WBJ-16DZ โดยมีแรงดันใช้งาน 0.40~0.60 MPa เส้นผ่านศูนย์กลางปาก 1 มม. และอัตราการไหล 60~85L/hวันที่ใช้ยาฆ่าแมลงมีแดดจัด อุณหภูมิ 23-32 ℃ดำเนินการสำรวจในวันที่ 1, 3, 5, 7, 10 และ 15 หลังจากการสมัครในระหว่างการสอบสวน จะมีการสุ่มจุดสุ่มตัวอย่าง 10 จุดจากแต่ละแปลง และสำรวจพืชอย่างต่อเนื่องในแต่ละจุด 10 ต้น รวมเป็น 100 ต้นบันทึกจำนวนแมลงที่มีชีวิต การเสียชีวิต พิษ และศัตรูธรรมชาติในต้นข้าวโพดแต่ละต้นสูตรการคำนวณที่เกี่ยวข้องมีดังนี้

อัตราการลดลงของแมลง =(จำนวนแมลงที่มีชีวิตก่อนการใช้ - จำนวนแมลงที่มีชีวิตหลังการใช้)/จำนวนแมลงที่มีชีวิตก่อนการใช้

ผลการป้องกันและควบคุม=( อัตราแมลงในพื้นที่บำบัดลดลง- อัตราแมลงในพื้นที่ควบคุมลดลง)/(100- อัตราแมลงในพื้นที่ควบคุมลดลง)*100%

1.5การจำแนกระดับโมเลกุลของ ACMNPV

1) ทดสอบตัวอย่างไวรัสเลือกสุราแม่ ACMNPV เพื่อกำหนดกิจกรรมในร่ม (ตัวอย่างที่ 1) การเตรียมทางชีวภาพ 10 ล้าน ACMNPV.Bt SC (ตัวอย่างที่ 2) ซากแมลงที่ติดไวรัสหลังจากการทดสอบประสิทธิภาพภาคสนาม (ตัวอย่างที่ 3) และตัวอ่อนรุ่นที่สองของพยาธิหนอนกระทู้หอมที่ติดเชื้อ ซากแมลงที่เก็บตัวอย่างที่ 3 (ตัวอย่างที่ 4) เป็นตัวอย่างไวรัสทดสอบ เพื่อตรวจสอบว่า AcMNPV ใน ACMNPV.Bt จำนวน 10 ล้านตัวมีฤทธิ์ฆ่าเชื้อแบคทีเรียต่อตัวอ่อนหนอนกระทู้ผักในฤดูใบไม้ร่วงหรือไม่

2) การสกัดดีเอ็นเอนำตัวอย่าง AcMNPV 1.0 มล. เติมน้ำกลั่น 99.0 มล. และเขย่าให้เข้ากันเป็นเวลา 1 นาทีใช้สารแขวนลอย 300μL หลังจากการสั่น เติมสารละลายอัลคาไลน์แคร็กกิ้ง 100μL อ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37 ℃ เป็นเวลา 30 นาทีเติมบัฟเฟอร์ Tris·HCl 200μL และปั่นแยกที่ 10,000 รอบ/นาที เป็นเวลา 8 นาทีนำส่วนลอยเหนือตะกอนไปในหลอดหมุนเหวี่ยง เติม Protease K 5μL และ SDS 60 μ L ลงในอ่างน้ำที่ 65 ℃ เป็นเวลา 2 ชั่วโมง นำออก และทำให้เย็นลงจนถึงอุณหภูมิห้องเติมฟีนอลอิ่มตัวของทริสผสม 650μL ลงไป ปั่นแยกที่ 10,000 รอบ/นาทีเป็นเวลา 5 นาที แล้วนำส่วนลอยเหนือตะกอนไปใส่ในหลอดสำหรับการปั่นแยกแบบใหม่เติมของเหลวผสมฟีนอลและคลอโรฟอร์ม (อัตราส่วนปริมาตร 1:1) ผสมกัน 650 ไมโครลิตร ปั่นแยกที่ 10,000 รอบ/นาทีเป็นเวลา 5 นาที จากนั้นนำส่วนลอยเหนือตะกอนไปใส่ในหลอดสำหรับปั่นแยกใหม่เติมคลอโรฟอร์มและไอโซเอมิลแอลกอฮอล์ผสมของเหลว 650μL (อัตราส่วนปริมาตร 24:1) ปั่นแยกที่ 10,000 รอบ/นาทีเป็นเวลา 5 นาที และสุดท้ายนำส่วนลอยเหนือตะกอนไปในหลอดสำหรับการปั่นแยกใหม่วัดความเข้มข้นของ DNA โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์

3) การขยาย PCRการใช้ระบบมาตรฐานซุปเปอร์มิกซ์ T3: ตัวอย่าง DNA 2 μ L ไพรเมอร์ 0.5μL สำหรับก่อนและหลัง T3 ซุปเปอร์มิกซ์ 18μL และ ddH₂O7μLเงื่อนไขการขยาย PCR คือ 95 ℃หลังจากการสลายสภาพก่อนกำหนด 3 นาที จะมีการดำเนินการรอบต่อไปนี้: 98 ℃ เป็นเวลา 15 วินาที, 52 ℃ เป็นเวลา 20 วินาที, 72 ℃ เป็นเวลา 20 วินาที และสุดท้ายคือ 72 ℃ เป็นเวลา 5 นาที รวมทั้งหมด 42 รอบ

4) DNA agarose เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสนำผลิตภัณฑ์ขยายสัญญาณ PCR 2μL และ DNA Marker ขนาด 5 kb แล้วใส่ agarose gel และอิเล็กโตรโฟเรติกที่ 180 V เป็นเวลา 20 นาทีหลังจากอิเล็กโตรโฟเรซิส ให้สังเกตผลิตภัณฑ์ PCR ในระบบสร้างภาพด้วยเจล

ไพรเมอร์ต้นน้ำ Polh:

อร๊ายยยยย

สีรองพื้นดาวน์สตรีม Polh:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

ไพรเมอร์อัพสตรีม Lef-8:

AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC

ไพรเมอร์ดาวน์สตรีม Lef-8:

GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC

ไพรเมอร์อัพสตรีม Lef-9

อร๊ายยยยย

ไพรเมอร์ดาวน์สตรีม Lef-9:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC

สุดท้าย ใช้ซอฟต์แวร์ DNAMAN6.0 เพื่อเปรียบเทียบลำดับ polh, lef-8 และ lef-9 ที่วัดได้

1.6การวิเคราะห์และประมวลผลข้อมูล

ข้อมูลการทดลองได้รับการประมวลผลโดยใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติ IBM SPSS 22.0

ในการทดลองกำหนดฤทธิ์ฆ่าแมลงด้วยไวรัส จะนับจำนวนแมลงที่ตายแล้วและแมลงมีชีวิตที่บำบัดด้วยความเข้มข้นแต่ละชนิด และคำนวณอัตราการตายและเปอร์เซ็นต์การตายที่ปรับแล้ว และแปลงเป็นค่าความน่าจะเป็นความเข้มข้นของการบำบัดแต่ละครั้งจะถูกแปลงเป็นค่า lgสมการการถดถอยของความรุนแรง (ความชัน ± SE) คำนวณผ่านค่าความน่าจะเป็นในการทำงานและน้ำหนัก และ LC₅₀ค่าและขีดจำกัดความเชื่อมั่น 95% และสุดท้ายก็ทำการทดสอบไคสแควร์ (²-ในการทดลองผลการควบคุมภาคสนาม จะนับจำนวนแมลงที่มีชีวิตในการรักษาแต่ละครั้ง และคำนวณอัตราการลดลงของศัตรูพืชผลการควบคุมคำนวณโดยใช้สูตรแก้ไข Microsoft Excelใช้วิธีการของ Duncan ในการวิเคราะห์ และใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียวเพื่อเปรียบเทียบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างการรักษา

แผนภูมิในข้อความทั้งหมดสร้างขึ้นโดยใช้ซอฟต์แวร์ Microsoft Excel

2.ผลลัพธ์และการวิเคราะห์

2.1ฤทธิ์ฆ่าแมลงของ AcMNPV ต่อตัวอ่อน Spodoptera frugiperda

ผลลัพธ์ของการทดสอบกิจกรรมภายในอาคาร (ตารางที่ 1) แสดงให้เห็นว่าหลังจากการบำบัด 7 วัน LC₅₀ของ AcMNPV ทำหน้าที่กับตัวอ่อนระยะที่ 2 ของ Spodoptera frugiperda คือ 4.1x10⁷PIB/มิลลิลิตร และ LC₉₀คือ 1.05x10⁸PIB/มล.หลังการรักษา 10 วัน LC₅₀ของ AcMNPV ทำหน้าที่กับตัวอ่อนระยะที่ 2 คือ 2.9x10⁷PIB/มิลลิลิตร และ LC₉₀คือ 7.8x10⁷PIB/มล.แอลซี₅₀และแอลซี₉₀ของ AcMNPV ทำหน้าที่กับตัวอ่อนระยะที่ 2 ของพยาธิหนอนกระทู้ตกหลังการรักษา 7 วัน ทั้งคู่สูงกว่า 10 วัน แสดงว่า AcMNPV มีฤทธิ์ฆ่าแมลงที่ดีต่อตัวอ่อน Spodoptera frugiperda ที่ 7 วัน

2.2 ผลการควบคุมภาคสนามของ AcMNPVBt ออกฤทธิ์กับตัวอ่อน Spodoptera frugiperda

ผลการทดลองประสิทธิภาพภาคสนามพบว่า 10 ล้าน AcMNPVBt SC (1500 มล./ชม²) มีผลค่อนข้างช้าต่อตัวอ่อนของ spodoptera frugiperdaผลการควบคุมโดยเฉลี่ยในวันที่ 1, 3 และ 5 หลังฉีดพ่นคือ 11.57%, 16.23% และ 15.56% ตามลำดับผลการควบคุมโดยเฉลี่ยในวันที่ 7 หลังฉีดพ่นมีเพียง 21.88%อย่างไรก็ตาม ในวันที่ 10 หลังฉีดพ่น ผลการควบคุมแมลงก็เพิ่มขึ้นทันทีเป็น 68.99% และผลการควบคุมโดยเฉลี่ยในวันที่ 15 หลังฉีดพ่นก็อยู่ที่ 66.87% เช่นกันอย่างไรก็ตาม เมื่อเปรียบเทียบกับสารเคมี Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% (300mL/hm²) มีผลฆ่าตัวอ่อนของ spodoptera frugiperda ได้ดี ซึ่งสามารถลดจำนวนแมลงได้อย่างรวดเร็วผลการควบคุมโดยเฉลี่ยในวันที่ 1, 3, 5 และ 7 หลังการให้ยาเท่ากับ 91.39%, 92.66%, 90.71% และ 87.19% ตามลำดับอย่างไรก็ตาม ผลการควบคุมโดยเฉลี่ยในวันที่ 10 เริ่มลดลงเหลือเพียง 67.63% และผลการควบคุมโดยเฉลี่ยในวันที่ 15 ลดลงเหลือ 51.60%ดูตารางที่ 2 สำหรับรายละเอียด

ขณะเดียวกันเรายังพบว่าอัตราการลดลงของแมลงในพื้นที่ควบคุมเป็นลบในวันที่ 1, 3 และ 5 หลังการบำบัด ซึ่งบ่งชี้ถึงจำนวนแมลงที่เพิ่มขึ้นหลังการรักษาวันที่ 7 เริ่มเป็นบวก (จำนวนแมลงเริ่มลดลง)อัตราการลดลงของแมลงโดยเฉลี่ยในวันที่ 10 และ 15 วันที่ 10 และ 15 อยู่ที่ 38.25% และ 47.00% ตามลำดับ ซึ่งมีความเป็นไปได้สูงที่เกี่ยวข้องกับความจริงที่ว่าตัวอ่อนของ Spodoptera frugiperda บางตัวเริ่มดักแด้ในดินและรุ่นที่ทับซ้อนกันหลังจากผ่านไป 10-15 วัน .

โดยสรุปจะเห็นได้ว่า 10 ล้าน AcMNPVBt SC (1500 มล./ชม²) มีผลควบคุมบางอย่างต่อ spodoptera frugiperda แต่ผลจะช้า และประสิทธิผลจะอยู่ที่ประมาณ 10-15 วันหลังการใช้

2.3 ผลกระทบของ AcMNPVBt กับศัตรูธรรมชาติ

ในระหว่างการทดลองภาคสนาม ผลกระทบของ 10 ล้าน AcMNPVนอกจากนี้ยังมีการตรวจสอบการระงับบีทีกับศัตรูธรรมชาติของศัตรูพืชในข้าวโพด เช่น แมงมุม เต่าทอง และแมลงปีกแข็งผลปรากฏว่า 10 ล้าน AcMNPVระบบกันสะเทือนของบีทีไม่มีความเสียหายอย่างมีนัยสำคัญต่อศัตรูธรรมชาติ เช่น แมงมุม เต่าทอง และแมลงปีกแข็ง โดยมีศัตรูธรรมชาติโดยเฉลี่ย 13.4 ตัวต่อต้น 100 ต้นอย่างไรก็ตาม สารเคมี Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% มีฤทธิ์เป็นพิษอย่างมีนัยสำคัญต่อศัตรูธรรมชาติ เช่น แมงมุม เต่าทอง และแมลงปีกแข็งในวันแรกหลังการบำบัด จำนวนศัตรูธรรมชาติโดยเฉลี่ยในข้าวโพด 100 ต้นมีเพียง 3.1 ต้น และในวันที่สามหลังการบำบัด พบศัตรูธรรมชาติประเภทต่างๆ เพียง 5.2 ตัว (รูปที่ 1)จะเห็นได้ว่า 10 ล้าน AcMNPVระบบกันสะเทือนบีทีมีผลในการป้องกันศัตรูธรรมชาติของสัตว์รบกวนได้ดี ในขณะที่ระบบกันสะเทือน Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% สร้างความเสียหายให้กับศัตรูธรรมชาติได้ค่อนข้างมาก

2.4 การจำแนกระดับโมเลกุลของ AcMNPV

ผลการขยาย PCR ของตัวอย่างทดสอบต่างๆ แสดงให้เห็นว่าชิ้นส่วนขยายของ polh, lef-8 และ lef-9 ของตัวอย่างที่ 1, 2, 3 และ 4 มีความสอดคล้องและมีขนาดถูกต้องผลิตภัณฑ์ PCR ของยีน polh, lef-8 และ lef-9 มีค่าเท่ากับ 0.54, 0.716 และ 0.29 kb ตามลำดับ (รูปที่ 2) ซึ่งพิสูจน์ว่า AcMNPV มีฤทธิ์ฆ่าแมลงต่อตัวอ่อนของ spodoptera frugiperda

สุดท้ายนี้ ซอฟต์แวร์ DNAMAN 6.0 ถูกใช้เพื่อจัดลำดับบนชิ้นส่วนที่ขยายของ polh, lef-8 และ le.f-9 ในตัวอย่างที่ 1, 2, 3 และ 4 (รูปที่ 3)ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าความคล้ายคลึงกันระหว่างลำดับการขยายของ polh, lef-8 และ lef-9 ในตัวอย่างนี้ 1, 2, 3 และ 4 คือ 100% ซึ่งบ่งชี้ว่าตัวอย่าง 1, 2, 3 และ 4 ทั้งหมดมีต้นกำเนิดมาจาก ไวรัสตัวเดียวกัน AcMNPV

3. การอภิปราย

AcMNPV เป็นไวรัสรูปแท่งแมลงที่ติดเชื้อในร่างกายของแมลงผ่านการให้อาหารไวรัสแพร่กระจายและแพร่กระจายไปทั่วร่างกายของแมลง ค่อยๆ แพร่เชื้อไปทั่วทั้งร่างกายและนำไปสู่ความตายในที่สุดผลการศึกษานี้บ่งชี้ว่า AcMNPV มีฤทธิ์ทางชีวภาพที่ดีต่อตัวอ่อนของ Spodoptera frugiperdaLC ของมันในวันที่ 7 และ 10 คือ 4.1x107 และ 2.9x107PIB/m ตามลำดับ และแสดงให้เห็นผลการควบคุมที่ดีในภาคสนามสารแขวนลอยแบบผสม 10 ล้าน AcMNPV.Bt (1500 มล./ชม²) มีผลการควบคุมโดยเฉลี่ยที่ดีในวันที่ 10 และ 15 หลังการรักษา สูงถึง 68.99% และ 66.87% ตามลำดับ และปลอดภัยสำหรับศัตรูธรรมชาติดังนั้น ควรเร่งความเร็วในการวิจัยและพัฒนาเพื่อให้ AcMNPV มีบทบาทมากขึ้นในการควบคุมทางชีวภาพของ Spodoptera frugiperdaสารแขวนลอย AcMNPV.Bt จำนวน 10 ล้านตัวที่ผลิตโดย Wuhan Chuqiang Biotechnology Co., Ltd. เป็นสารประกอบของ AcMNPV และสารกำจัดแมลงชีวภาพ Bacillus thuringiensis (Bt) ซึ่งสามารถปรับปรุงฤทธิ์ฆ่าแมลงของไวรัสได้อย่างมีนัยสำคัญเนื่องจากบีทีเป็นยาฆ่าแมลงในวงกว้างซึ่งมีฤทธิ์ฆ่าแมลงจากจุลินทรีย์ได้ดี เมื่อรวม AcMNPV เข้ากับบีที ความเป็นพิษของมันจึงควรได้รับการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับสูตรผสมเดียวสิ่งนี้ไม่เพียงขยายขอบเขตการฆ่าแมลงของบีที แต่ยังเพิ่มความเป็นพิษอีกด้วย โดยบรรลุเป้าหมายในการใช้สูตรเดียวในการควบคุมสัตว์รบกวนหลายชนิดนี่คือเหตุผลว่าทำไมการระงับ AcMNPV.Bt จำนวน 10 ล้านรายการจึงสามารถส่งเสริมอย่างกว้างขวางในผัก ไม้ผล และข้าวดังนั้น 10 ล้าน AcMNPV.Bt จึงสามารถส่งเสริมให้เป็นตัวแทนควบคุมสีเขียวสำหรับ Spodoptera frugiperda ในข้าวโพดได้

ในการศึกษานี้ เมื่อทำการทดสอบประสิทธิภาพภาคสนาม ในกรณีที่ประชากรแมลงลดลงอย่างรวดเร็วในพื้นที่ควบคุม (อัตราการลดลงของแมลงในวันที่ 15 อยู่ที่ 47.00%)，ผลการควบคุมโดยเฉลี่ยของ 10 ล้าน AcMNPV.Bt ระบบกันสะเทือน (1500 มล./ชม²) วันที่ 15 หลังการรักษา อยู่ที่ 66.87% มีแนวโน้มสูงขึ้นอย่างรวดเร็วในขณะที่ผลการควบคุมโดยเฉลี่ยของสารเคมีกำจัดศัตรูพืช 15% เมทอกซาโซล · indefencarb SC (300 มล./ชม.²) ในวันที่ 15 หลังการรักษา ลดลงเหลือ 51.60%แม้จะเห็นได้ว่าช่วงล่าง 10 ล้าน AcMNPV.Bt (1500 mL/hm²) มีผลการควบคุมบางอย่างต่อ Spodoptera frugiperda ในวันที่ 10 ถึง 15 เมื่อพิจารณาถึงประสิทธิภาพที่ช้าของสารกำจัดศัตรูพืชทางชีวภาพและอายุการใช้งานที่สั้นและรุ่นที่ทับซ้อนกันของตัวอ่อน Spodoptera frugiperda ขอแนะนำให้เพิ่มจำนวนการตรวจสอบและขยายเวลาการตรวจสอบเมื่อ ดำเนินการทดลองประสิทธิภาพภาคสนามของสารกำจัดศัตรูพืชทางชีวภาพ (โดยเฉพาะการเตรียมไวรัส) ซึ่งอาจบรรลุผลการทดลองในอุดมคติมากกว่านี่เป็นข้อจำกัดของการศึกษาวิจัยนี้ด้วยโดยสรุป เมื่อเปรียบเทียบกับสารชีวภาพ สารเคมีมีฤทธิ์ฆ่าแมลงศัตรูพืชค่อนข้างสูงกว่าและออกฤทธิ์เร็วสามารถใช้เป็นมาตรการป้องกันและควบคุมฉุกเฉินในระหว่างการระบาดของศัตรูพืชเมื่ออันตรายจากศัตรูพืชเกิดขึ้นเพียงเล็กน้อย สารกำจัดศัตรูพืชทางชีวภาพสามารถแทนที่สารเคมีกำจัดศัตรูพืชในฐานะหนึ่งในมาตรการป้องกันและควบคุมสีเขียว ซึ่งช่วยลดมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อมและบรรลุผลของการปกป้องระบบนิเวศทางการเกษตร

นอกจากนี้ ยีน Polh (โพลีเฮดริน) ที่ใช้ในการศึกษานี้เป็นประเภทของโปรโมเตอร์โปรตีนโพลีฮีดรัล โดยและ P10 เป็นโปรโมเตอร์ที่ใช้บ่อยที่สุดใน baculovirus expression vector system (BEVS) ซึ่งทั้งสองอย่างนี้แสดงออกอย่างสูงในระยะท้าย ของการติดเชื้อไวรัส^[13]-อย่างไรก็ตาม กิจกรรมของโปรโมเตอร์ p10 ต่ำกว่ากิจกรรมของโปรโมเตอร์ polh ดังนั้นจึงมักใช้เพื่อการแสดงออกของโปรตีนจากภายนอกยีน lef-8 สามารถเข้ารหัสหน่วยย่อยที่ใหญ่ที่สุดของ RNA polymerase ของไวรัสได้ และเป็นปัจจัยหนึ่งของการแสดงออกในช่วงปลาย^[14]-lef-9 เป็นปัจจัยการแสดงออกช่วงท้ายประเภทหนึ่งที่ร่วมเข้ารหัสหน่วยย่อยโปรตีนที่ซับซ้อนด้วย lef-4, lef-8 และ p47 ใน baculovirusesการวิจัยพบว่าไวรัสที่ไม่มียีน lef-9 ไม่สามารถสร้างอนุภาคไวรัสที่มีฤทธิ์ในการติดเชื้อได้ ในขณะที่ไวรัสที่มียีน lef-9 สามารถฟื้นฟูกิจกรรมการติดเชื้อของไวรัสได้โดยการฟื้นฟูดังนั้นยีน lef-9 จึงเป็นยีนที่จำเป็นสำหรับ baculovirus เพื่อสร้าง BV (Budded Virus) ที่มีฤทธิ์ในการติดเชื้อ^[15]-จะเห็นได้ว่ายีน lef-8 และ lef-9 มีการอนุรักษ์สูงในไวรัสโพลีฮีโดรซีสนิวเคลียร์ประเภทต่างๆ ดังนั้นยีน lef-8 และ lef-9 จึงสามารถใช้เป็นพื้นฐานในการระบุประเภทของไวรัสได้ดังนั้น การศึกษานี้จึงใช้ polh, lef-8 และ lef-9 เป็นวัตถุการตรวจจับ และด้วยการจัดลำดับยีน ความคล้ายคลึงกันจึงอยู่ในระดับสูง โดยทั้งหมดสูงถึง 100%วิธีการตรวจจับระดับโมเลกุลอย่างรวดเร็วช่วยยืนยันอีกครั้งว่า AcMNPV มีฤทธิ์ฆ่าแมลงที่ดีต่อ Spodoptera frugiperda ซึ่งเหมาะสำหรับการส่งเสริมและการประยุกต์ใช้เพิ่มเติมในการป้องกันและควบคุม Spodoptera frugiperda

ตั้งแต่ปี 2019 Spodoptera frugiperda ได้รุกรานจีนและกลายเป็นศัตรูพืชสำคัญของข้าวโพดได้ก่อให้เกิดการตั้งถิ่นฐานของประชากรในบางพื้นที่ทางตอนใต้และตะวันตกเฉียงใต้ของจีน ก่อให้เกิดความสูญเสียอย่างใหญ่หลวงต่ออุตสาหกรรมข้าวโพดของจีน และคุกคามความมั่นคงทางอาหารของจีนอย่างร้ายแรง^[16]-เมื่อต้องเผชิญกับสถานการณ์การป้องกันและควบคุมที่รุนแรงในปัจจุบันของ Spodoptera frugiperda ในประเทศจีน จึงเป็นเรื่องเร่งด่วนที่จะต้องเร่งการคัดกรองและพัฒนายาฆ่าแมลงที่มีประสิทธิภาพสำหรับการป้องกันและควบคุม Spodoptera frugiperda^[17]-แม้ว่ายาฆ่าแมลงจากไวรัสจะจำกัดการใช้อย่างแพร่หลายเนื่องจากอัตราการออกฤทธิ์ที่ช้าและสเปกตรัมของยาฆ่าแมลงที่แคบ ในบริบทของความสนใจที่เพิ่มขึ้นต่อระบบนิเวศและการปกป้องสิ่งแวดล้อม ยาฆ่าแมลง Baculovirus คาดว่าจะมีการใช้กันอย่างแพร่หลายมากขึ้นในการผลิตทางการเกษตร เนื่องจากข้อได้เปรียบที่สำคัญเหนือ ยาฆ่าแมลงแบบดั้งเดิมเนื่องจากความไวของการเตรียมไวรัสแมลงต่อสภาวะภายนอก เช่น อุณหภูมิสูง แสงแดด ฝน และอายุของศัตรูพืช[18]ดังนั้นจึงขอแนะนำให้ใช้ยาฆ่าแมลงในช่วงที่มีตัวอ่อนแมลงศัตรูพืชเกิดขึ้นสูงสุดควรใช้หลัง 16:00-17:00 น. ในวันที่มีแดดเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบของสภาพแวดล้อมที่ไม่เอื้ออำนวย เช่น อุณหภูมิและแสงที่สูง เพื่อให้สูตรไวรัสสามารถมีบทบาทได้ดีขึ้น และปรับปรุงผลการควบคุมศัตรูพืช .